مجموعة أدوات الكشف عن الحمض النووي لفيروس كورونا الجديد (SARS-Cov-2).
New Cأوروnavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluخامscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】مجموعة أدوات الكشف عن الحمض النووي لفيروس كورونا الجديد (SARS-Cov-2) (طريقة مسبار الفلورسنت RT-PCR)
【Packaging specifications 】25 اختبارًا/مجموعة
【Intended usعمر】
تُستخدم هذه المجموعة للكشف النوعي عن الحمض النووي الناتج عن فيروس كورونا الجديد في مسحات البلعوم الأنفي، ومسحات الفم والبلعوم (الحنجرة)، ومسحات الأنف الأمامية، ومسحات المحارة الوسطى، وغسولات الأنف، وشفاطات الأنف من الأفراد الذين يشتبه مقدم الرعاية الصحية في إصابتهم بكوفيد-19. يمكن استخدام اكتشاف جينات ORF1ab وN لفيروس كورونا الجديد في التشخيص المساعد والمراقبة الوبائية لعدوى فيروس كورونا الجديد.
【Principles of the pروسdure 】
تم تصميم هذه المجموعة لتحقيقات TaqMan المحددة والبادئات المحددة المصممة لتسلسلات جينات فيروس كورونا الجديد (SARS-Cov-2) ORF1ab وN. يحتوي محلول تفاعل PCR على 3 مجموعات من الاشعال المحددة وتحقيقات الفلورسنت للكشف المحدد عن الأهداف، ويتم استخدام مجموعة إضافية من الاشعال المحددة وتحقيقات الفلورسنت كعنصر تحكم قياسي داخلي للمجموعة للكشف عن جينات التدبير المنزلي الداخلية.
مبدأ الاختبار هو أن مسبار الفلورسنت المحدد يتم هضمه وتحلله بواسطة نشاط نوكلياز إنزيم طق في تفاعل PCR، بحيث يتم فصل مجموعة الفلورسنت المراسل ومجموعة الفلورسنت المخمد، بحيث يمكن لنظام مراقبة الفلورسنت الحصول على الفلورسنت إشارة، ومن ثم من خلال تأثير التخصيب لتضخيم PCR، تصل إشارة مضان المسبار إلى قيمة عتبة محددة - قيمة Ct (عتبة الدورة). في حالة عدم وجود amplicon مستهدف، تكون مجموعة مراسلي المسبار قريبة من مجموعة التبريد. في هذا الوقت، يحدث نقل طاقة الرنين الفلوري، ويتم إخماد مضان مجموعة المراسلين بواسطة مجموعة التبريد، بحيث لا يمكن اكتشاف إشارة الفلورسنت بواسطة أداة PCR الفلورسنت.
من أجل مراقبة استخدام الكواشف أثناء الاختبار، تم تجهيز المجموعة بعناصر تحكم إيجابية وسلبية: تحتوي السيطرة الإيجابية على البلازميد المؤتلف في الموقع المستهدف، والتحكم السلبي هو الماء المقطر، والذي يستخدم لمراقبة التلوث البيئي. من المستحسن تعيين عنصر تحكم إيجابي وعنصر تحكم سلبي في وقت واحد عند الاختبار.
【Main comبونينts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | كومبونإنتس | |
| نامe | المواصفاتification | الكميةity | الكميةity | |
| السيطرة الإيجابية | 180 ميكرولتر/قارورة | 1 | 1 | البلازميدات المصنعة صناعيا، الماء المقطر |
| السيطرة السلبية | 180 ميكرولتر/قارورة | 1 | 1 | الماء المقطر |
| مزيج السارس-كوف-2 | 358.5 ميكرولتر/قارورة | 1 | / | أزواج تمهيدية محددة، مجسات فلورسنت للكشف المحددة، dNTPs، MgCl2، KCl، Tris-Hcl، الماء المقطر، إلخ |
| مزيج الانزيم | 16.5 ميكرولتر/قارورة | 1 | / | إنزيمات طق، المنتسخة العكسية، إنزيمات UNG، إلخ. |
| مزيج SARS-Cov-2 (مجفف بالتجميد) | 25 اختبار/قارورة | / | 1 | أزواج تمهيدية محددة، تحقيقات الفلورسنت للكشف المحددة، dNTPs، إنزيمات طق، النسخ العكسي، الماء المقطر، إلخ. |
| 2x عازلة | 375 ميكرولتر/قارورة | / | 1 | MgCl2، KCl، Tris-Hcl، الماء المقطر، إلخ. |
ملحوظة:(1) لا يمكن خلط المكونات الموجودة في مجموعات الدُفعات المختلفة أو تبادلها.
(2) قم بإعداد الكاشف الخاص بك: مجموعة أدوات استخلاص الحمض النووي.
【Storage conditions و expiration date 】
For BST-SARS-25:النقل والتخزين في درجة حرارة -20±5 درجة مئوية لفترة طويلة.
For BST-SARS-DR-25:النقل في درجة حرارة الغرفة. يُخزن في درجة حرارة -20±5 درجة مئوية لفترة طويلة.
تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. تم تحديد فترة الصلاحية مبدئيًا لمدة 12 شهرًا.
انظر الملصق لمعرفة تاريخ الصنع والاستخدام.
بعد الفتح لأول مرة، يمكن تخزين الكاشف في درجة حرارة -20±5 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن شهر واحد أو حتى نهاية فترة الكاشف، أي التاريخ يأتي أولاً، لتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة، وعدد مرات تجميد الكاشف -يجب ألا تتجاوز دورات الذوبان 6 مرات.
【Applicable instrument】ABI 7500، SLAN-96P، روش-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. نوع العينة المطبق: محلول الحمض النووي المستخرج.
2. تخزين العينات ونقلها: قم بتخزينها في درجة حرارة -20 ± 5 درجة مئوية لمدة 6 أشهر. قم بتجميد العينات وذوبان الجليد فيها بما لا يزيد عن 6 مرات.
【TESTing metهود】
1.Nucleic acid extraction
حدد مجموعة أدوات استخراج الحمض النووي المناسبة لاستخراج الحمض النووي الفيروسي، واتبع تعليمات المجموعة المقابلة. يوصى باستخدام مجموعة أدوات استخلاص وتنقية الحمض النووي التي تنتجها شركة Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. أو مجموعة أدوات تنقية الحمض النووي المكافئة.
2. Reaction رياجnt prepآراtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) قم بإزالة مزيج SARS-Cov-2 ومزيج الإنزيم، ثم قم بإذابة المزيج بالكامل في درجة حرارة الغرفة جيدًا بواسطة جهاز Vortex ثم جهاز الطرد المركزي لفترة وجيزة.
(2) تمت إضافة 16.5 ميكرولتر من مزيج الإنزيم إلى 358.5 ميكرولتر من مزيج SARS-Cov-2 وخلطهما جيدًا للحصول على محلول التفاعل المختلط.
(3) إعداد أنبوب ثماني نظيف PCR 0.2 مل ووضع علامة عليه مع 15uL من محلول التفاعل المختلط أعلاه لكل بئر.
(4) أضف 15 ميكرولتر من محلول الحمض النووي المنقى، والتحكم الإيجابي والتحكم السلبي، وقم بتغطية غطاء الأنبوب الثماني بعناية.
(5) امزج جيدًا عن طريق قلبه رأسًا على عقب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة لتركيز السائل في قاع الأنبوب.
1
2.2 For BST-ريال سعوديS-DR-25:
(1) أضف المخزن المؤقت 375ul 2x إلى مزيج SARS-Cov-2 ((المجفف بالتجميد) لتحضير مزيج التفاعل. امزج جيدًا عن طريق سحب العينة ثم جهاز الطرد المركزي لفترة وجيزة. (بمجرد تحضير مزيج التفاعل، يوصى بتخزينه في درجة حرارة -20 درجة مئوية) تخزين طويل الأمد.)
(2) قم بإعداد أنبوب PCR ثماني نظيف سعة 0.2 مل ووضع علامة عليه بـ 15 ميكرولتر من مزيج التفاعل لكل بئر.
(3) أضف 15 ميكرولتر من محلول الحمض النووي المنقى، والتحكم الإيجابي والتحكم السلبي، وقم بتغطية غطاء الأنبوب الثماني بعناية.
(4) امزج جيدًا عن طريق قلبه رأسًا على عقب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة لتركيز السائل في قاع الأنبوب.
3. تفاعل البوليميراز المتسلسل ampcom.lification (يرجى الرجوع إلى دليل الأداة لإعدادات التشغيل.)
3. 1 ضع أنبوب PCR 8 في غرفة العينة لجهاز PCR الفلوري، واضبط العينة المراد اختبارها والتحكم الإيجابي والتحكم السلبي وفقًا لترتيب التحميل.
3.2 قناة الكشف عن الإسفار:
(1) يختار جين ORF1ab قناة الكشف عن FAM (المراسل: FAM، Quencher: لا شيء).
(2) يختار جين N قناة الكشف لـ VIC (المراسل: VIC، Quencher: لا شيء).
(3) يختار الجين القياسي الداخلي قناة الكشف عن CY5 (المراسل: CY5، المخمد: لا شيء).
(4) تم ضبط المرجع السلبي على ROX.
3.3 إعداد معلمة برنامج PCR:
| خطوة | درجة الحرارة (°C) | وقت | عدد الدورات | |
| 1 | رد فعل النسخ العكسي | 50 | 15 دقيقة | 1 |
| 2 | تنشيط انزيم طق | 95 | 2.5 دقيقة | 1 |
| 3 | تنشيط انزيم طق | 93 | 10 ثانية | 43 |
| الصلب التمديد واكتساب مضان | 55 | 30 ثانية | ||
بعد الضبط قم بحفظ الملف وتشغيل برنامج التفاعل..
4.Results analysis
بعد انتهاء البرنامج، يتم حفظ النتائج تلقائيًا، ويتم تحليل منحنى التضخيم. يتم ضبط منحنى التضخيم على العتبة الافتراضية للأداة.
【Explanation of test results 】
1. تحديد صلاحية التجربة: التحكم الإيجابي FAM، يجب أن يكون لقناة VIC منحنى تضخيم نموذجي، وتكون قيمة Ct عمومًا أقل من 34، ولكنها قد تتقلب بسبب إعدادات عتبة مختلفة لأدوات مختلفة. يجب أن تكون قناة التحكم السلبية FAM وVIC غير مضخمة Ct. ومن المتفق عليه أنه يجب استيفاء المتطلبات المذكورة أعلاه في نفس الوقت، وإلا فإن هذا الاختبار غير صالح.
2. نتيجة الحكم
| قناة FAM/VIC | نتيجة الحكم |
| ط م <37 | اختبار العينة إيجابي |
| 37 درجة مئوية أقل من 40 | منحنى التضخيم على شكل حرف S، وتحتاج العينات المشبوهة إلى إعادة فحصها؛ فإذا كانت نتائج إعادة الفحص متطابقة، يحكم بأنها إيجابية، وإلا فهي سلبية |
| Ct≥40 أو لا يوجد تضخيم | اختبار العينة سلبي (أو أقل من الحد الأدنى لاكتشاف المجموعة) |
ملحوظة: (1) إذا كانت كل من قناة FAM وقناة VIC إيجابية في نفس الوقت، فسيتم تحديد أن SARS-Cov-2 إيجابية.
(2) إذا كانت قناة FAM أو قناة VIC إيجابية والقناة الأخرى سلبية، فيجب تكرار الاختبار. إذا كانت إيجابية في نفس الوقت، فسيتم الحكم عليها على أنها إيجابية لـ SARS-Cov-2، وإلا فسيتم الحكم عليها على أنها سلبية لـ SARS-Cov-2.
المنتجات ذات الصلة
-
مجموعة أدوات الكشف عن الأجسام المضادة IgM/IgG لكوفيد-19
مجموعة أدوات الكشف عن الأجسام المضادة IgM/IgG لـCOVID-19 (طريقة التحليل المناعي للذهب الغروي) دليل المنتج 【اسم المنتج 】مجموعة اكتشاف الأجسام المضادة IgM/IgG لـCOVID- 19 (طريقة التحليل المناعي للذهب الغرواني) 【مواصفات التعبئة والتغليف】 1 اختبارات/مجموعة، 10 اختبارات/مجموعة 【 الملخص: تنتمي فيروسات كورونا الجديدة إلى جنس β. كوفيد-19 هو مرض معدٍ يصيب الجهاز التنفسي الحاد. الناس عرضة بشكل عام. في الوقت الحالي، يعد المرضى المصابون بفيروس كورونا الجديد المصدر الرئيسي...
-
مجموعة أدوات استخلاص أو تنقية الحمض النووي
مجموعة أدوات استخلاص أو تنقية الحمض النووي أو تخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية. يجب أن يتم نقل العينة باستخدام تجعيد بدرجة حرارة 0 درجة مئوية. مقدمة تم تصميم مجموعة استخلاص أو تنقية الحمض النووي (طريقة الخرز المغناطيسي) للتنقية الآلية للحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي (DNA) من سوائل الجسم (مثل المسحات والبلازما والمصل) باستخدام أدوات استخلاص الحمض النووي الآلية. توفر تقنية الجسيمات المغناطيسية DNA/RNA عالي الجودة مناسب...
-
مجموعة فحص مستضد SARS-CoV-2 (المناعي...
مجموعة مقايسة مستضد SARS-CoV-2 (طريقة التحليل اللوني المناعي) دليل المنتج 【اسم المنتج】مجموعة مقايسة مستضد SARS-CoV-2 (طريقة التحليل اللوني المناعي) 【مواصفات التعبئة والتغليف】 اختبار/مجموعة واحدة 【الملخص】 تنتمي فيروسات كورونا الجديدة إلى جنس β. كوفيد-19 هو مرض معدٍ يصيب الجهاز التنفسي الحاد. الناس عرضة بشكل عام. في الوقت الحالي، يعد المرضى المصابون بفيروس كورونا الجديد هم أهم...
-
طقم فحص مستضد SARS-CoV-2
مجموعة مقايسة مستضد SARS-CoV-2 (طريقة التحليل اللوني المناعي) دليل المنتج 【اسم المنتج】مجموعة مقايسة مستضد SARS-CoV-2 (طريقة التحليل اللوني المناعي) 【مواصفات التعبئة والتغليف】 اختبار/مجموعة واحدة، 25 اختبارًا/مجموعة، 100 اختبار/مجموعة 【الملخص】 تنتمي فيروسات كورونا الجديدة إلى جنس β. كوفيد-19 هو مرض معدٍ يصيب الجهاز التنفسي الحاد. الناس عرضة بشكل عام. في الوقت الحالي، يعد المرضى المصابون بفيروس كورونا الجديد المصدر الرئيسي للعدوى؛ الأشخاص المصابين بدون أعراض...